Prozedur zur Kalibrierung von HPLC-Systemen

Prüfung der Gradientenformung

Prinzip: Messung der relevanten Parameter (Linearität, Richtigkeit und Drift) der Gradientenformung, sowie die Verzögerungsvolumina unter Zusatz eines kleinen Anteils Aceton zu einer der beiden Komponenten des binären Test-Gradienten.

Betroffene Systemkomponenten: Detektor, RP-Säule, Pumpe, Restriktionskapillare

Abbildung 1Abbildung 1

Auswertung Gradientenstufen
Nach dynamischer Bestimmung der Gradientenstufen durch Differenzierung des Chromatogramms wird

  • die mittlere Stufenhöhe (Average height)
  • das Basislinien-Rauschen (Noise) und
  • die Drift

berechnet.

Formel 1: Berechnung des RauschensFormel 1: Berechnung des Rauschens
Formel 2: Berechnung des Gradienten-DriftFormel 2: Berechnung des Gradienten-Drift

Gradientenstufe 100% - 0% B:

Berechnung des Gradienten-Verzögerungsvolumens auf verschiedenen Niveaus (siehe Abbildung 2).

Abbildung 2Abbildung 2